mansion88明升(中国)

多克隆抗血清制备案例

1、实验目的

以客户在mansion88明升(中国)制备的多肽A为抗原，偶联KLH免疫新西兰白兔，取得特异性多克隆抗血清。

2、实验设计

（1）设计多肽序列，合成多肽，多肽偶联KLH；
（2）免疫2只新西兰大白兔，3-4次免疫，收取抗血清；
（3）抗血清效价检测；

3、多肽合成

3.1、合成多肽HPLC检测结果

Sample ID:	ZD2018D00XXXX
Sequence:	XXXXXXXXXXXX-C
Column:	4.6mm*250mm, GS-120-5-C18-BIO
Calculation Type:	Percent
Solvent A:	0.1% Trifluoroacetic in 100% Acetonitrile
Solvent B:	0.1% Trifluoroacetic in 100% water
Gradient:	A	B
	0.00min 12%	88%
	25min  37%	63%
	25.1min 100%	0%
	30min  stop
Flow rate:	1.0ml/min
Wavelength:	220nm
Volume:	10ul

3.2、合成多肽MS检测

MW:	1543.73	Probe bias:	-3.5kv
Probe:	ESI	Detector:	1.0kv
DL:	-20.0v	T.Flow:	0.2ml/min
DL Temp:	250℃	B.conc:	50%H2O/50%ACN
Block Temp:	200℃

4.抗血清效价检测结果

包被抗原：多肽A
包被浓度：5 μg/ml， 100 μl / 孔
包被缓冲液：磷酸盐缓冲液 (PBS， pH 7.4)
二抗：山羊抗兔-HRP，1/5000

起始稀释度: 1:500
效价即样品OD/空白OD ≥2.1的最高稀释度

5.实验结论

顺利获得ELISA检测效价得出，多肽A抗血清效价在121.5K左右。

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